NEB末端修飾酶
--末端磷酸化、去磷酸化、末端補(bǔ)平、末端加A尾
北京云肽生物科技代理美國進(jìn)口NEB堿性磷酸酶、T4 DNA聚合酶、Klenow片段（DNA聚合酶I大片段）、快速末端平齊試劑盒、Taq DNA聚合酶等，用于DNA末端磷酸化、去磷酸化、末端補(bǔ)平/末端平齊化、未端加A尾等。NEB末端修飾酶提供豐富產(chǎn)品選擇，經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)控，性能穩(wěn)定可信賴。
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一、末端磷酸化--T4 PNK
NEB T4 多聚核苷酸激酶(T4 Polynucleotide Kinase，T4 PNK，貨號M0201)，支持對DNA、RNA進(jìn)行5'末端磷酸化，以進(jìn)行連接反應(yīng)，并同時具有3'磷酸酶活性，可去除3磷酸基團(tuán)，可用于對DNA、RNA進(jìn)行末端標(biāo)記，作為探針和進(jìn)行DNA測序。
二、末端去磷酸化--堿性磷酸酶
1、NEB蝦堿性磷酸酶(rSAP)
NEB蝦破性磷酸酶(Shrimp Alkaline phosphatase，rSAP，貨號M0371)，是一種不耐熱的重組堿性磷酸酶，用于DNA、RNA的5'未端和3末端去磷酸化。可作用于5'末端突出端、5'末端凹陷端、平末端，并可降解PCR反應(yīng)中的游離dNTP。NEB蝦堿性磷酸酶可用于線性化質(zhì)粒DNA去磷酸化防止自連、用于克隆或探針末端標(biāo)記、制備DNA測序和SNP分析模板等。NEB蝦堿性磷酸酶rSAP在65℃下加熱5min可wan全且不可逆地失活，無需在連接或末端標(biāo)記前去除，減少純化步驟。
2、NEB熱敏磷酸酶(AnP)
NEB熱敏磷酸酶(Antarctic Phosphatase，AnP，貨號M0289)，是不耐熱的重組堿性磷酸酶，反應(yīng)條件靈活，兼容各類限制性內(nèi)切酶緩沖液，無需純化，用于DNA、RNA的5'末端和3'末端去磷酸化，可作用于5'末端突出端、5'末端凹陷端、平末端，并可降解PCR反應(yīng)中的游離dNTP。NEB熱敏磷酸酶可用于防止線性載體自連、制備DNA測序和SNP分析模板。NEB熱敏研酸酶AnP在80℃下加熱2min可wan全且不可逆地失活，無需在連接或末端標(biāo)記前去除，減少純化步驟。
3、NEB快速CIP
NEB快速CIP(Quick CIP，貨號M0525)，是熱敏重組型小牛腸堿性磷酸酶，用于DNA、RNA的5'末端和3'末端去磷酸化，可在10min內(nèi)完成5'末端突出端、5'末端凹陷端、平末端的去磷酸化，也可用于降解PCR反應(yīng)中的dNTP。相比小牛腸堿性磷酸酶CIP，NEB快速CIP活性更高，所需酶量更少，降低每次反應(yīng)的成本;無需鋅等額外添加劑，并縮短溫育時間;兼容各類限制性內(nèi)切酶緩沖液，無需純化;快速且不可逆的熱失活特性，減少純化步驟;重組酶具備更高純度、更高批次間一致性、更高性價比。NEB快速CIP在80℃下加熱2min可wan全且不可逆地失活，無需在連接或末端標(biāo)記前去除。
重組蝦堿性磷酸酶 M0371 | 熱敏磷酸酶 M0289 | 快速CIP M0525 | |
100%熱失活 | 5min/65°c | 2min/80°c | 2min/80°c |
高比活性 | • | • | |
改進(jìn)穩(wěn)定性 | • | • | |
直接用于NEBbuffers | • | • | • |
需額外添加 | •（Zn2+） | • | |
省時步驟 | • |
三、末端補(bǔ)平/末端平齊化
1、NEB T4 DNA 聚合酶
NEB T4 DNA 聚合酶(T4 DNAPolymerase、貨號M0203)。具有5’→3’方向DNA合成功能，以及很強(qiáng)的3’→5’核酸外切酶活性，可進(jìn)行缺口填充，切除3’突出末端或補(bǔ)平5'突出末端，形成平末端。NEB T4 DNA 聚合酶不具有5'→3'核酸外切酶活性。
2、NEB DNA聚合酶l大片段(Klenow片段)
NEB DNA 聚合酶I大片段(DNA Polymerase l,Large Fragment,Klenow片段，貨號M0210)，是大腸桿菌(E.coli)DNA聚合酶l的蛋白水解產(chǎn)物，保留了聚合酶活性，以及3'→5'核酸外切酶活性，但不具有5’→3核酸外切酶活性。
3、NEB快速末端平齊化試劑盒
NEB快速末端平齊化試劑盒(Quick Blunting Kit，貨號E1201)，可以將不匹配的DNA5’或3'突出末端轉(zhuǎn)化為5"磷酸化的平末端，可在30min內(nèi)完成限制性內(nèi)切酶消化的DNA末端平齊化，以便與平末端DNA克隆載體連接。NEB快速末端平齊化試劑盒作為即用型預(yù)混液，可在室溫下反應(yīng)，適用于剪切的、霧化的、經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNA進(jìn)行末端平齊化，以便與質(zhì)粒、粘性質(zhì)粒cosmid、F黏粒fosmid、BAC載體進(jìn)行連接。
T4 DNA 聚合酶 M0203 | DNA聚合酶I大片段(Klenow片段)M0210 | 快速末端平齊化試劑盒E1201 | 綠豆核酸酶 M0250 | |
5’突出末端補(bǔ)平 | • | • | • | |
3’突出末端切割 | • | • | • | • |
5’突出末端切割 | • |
四、末端加A尾
1、NEB Klenow片段
NEB Klenow片段 (Klenow Fragment，貨號M0212)，重組來源，保留了聚合酶活性、不具有5’→3"核酸外切酶活性，經(jīng)突變(D355A、E357A)去除了3'→5'核酸外切酶活性，可用于向PCR產(chǎn)物的平末端添加A尾。
2、NEB Taq DNA 聚合酶
NEB Taq DNA 聚合酶(Taq DNA Polymerase)在PCR反應(yīng)時，可在每條PCR擴(kuò)增產(chǎn)物末端自動添加一個3"-A突出未端，直接用于T/A連接。NEB提供多種熱啟動Taq DNA聚合酶，滿足各類實驗需求。
Klenow片段，3'→5'exo- | Taq DNA 聚合酶 | |
反應(yīng)溫度 | 37°C | 75℃ |
熱失活 | 75℃ 20min | 否 |
核苷酸輔因子 | dATP | dATP |
北京云肽生物科技代理的末端修飾酶
